| 点击上方“微生物发酵”关注我们 根据粉丝提出的问题,于2024年6月更新,若有不足可留言。
▶微生物检测方法分为直接法和间接法,在这里之所以将平板计数也归为直接法,是因为该方法不需要额外的仪器设备,将其归为间接法也是可以的。需要注意的是平板计数的方法是活菌计数,显微计数在特定染料处理后也可以进行活菌计数,并可以对不同类型微生物进行区分,比如革兰氏染色,流式细胞仪可以进行更为复杂的计数和分离。
▶比浊和重量法都是我们常用的衡量生物量的方法,不多做解释。代谢法在这里是指通过微生物代谢活动间接衡量生物量的方法。不同数量的微生物,其底物的消耗,产物的生成,遗传因子的数量等都是不同的。比如通过测量DNA含量,总氮,总碳,基于微生物生长动力学的生物量模型,还有当前比较热门的的微生物组学的方法,也是通过对rna,特定基因(Cpn60蛋白,rpoB一般为一些保守的基因)的含量进行计数的。
▶因此我们需要根据实际情况选择,建立适合自己的微生物生物量的检测方法。
一直认为在复杂的培养基中霉菌是没有办法计数的,今天介绍一个国标的计数方法。 ▶常用方法 如果使用没有固形物的或者固形物含量较低的培养基,霉菌生物量可以用干重和湿重来衡量。这也是非常行之有效的方法。 ▶霉菌平板计数 稀释涂布,然后平板计数是我们常用来测细菌、酵母等单细胞微生物生物量的方法,但是如果用这种方法来测定霉菌的生物量该如何测定呢?国标 GB 4789.15-2016(https://kdocs.cn/l/cp9JXROMZvCJ)给出了答案:
对于没有办法测定湿重和干重的情况下,平板计数可以作为一种选择,其准确性有待验证。 ▶显微计数 同样,利用显微镜计数方法也是我们经常用来对酵母、细菌等单细胞微生物计数。但是利用显微镜怎么对丝状真菌进行计数呢?
▶HHD-20郝氏计测玻片,又叫霍华德霉菌计数板,包括载玻片、盖玻片和配片(侧位计),用于计算霉菌的数量,主要应用于食品卫生检验领域。
有时候我们的物料中或者发酵制品中含有多种不同属的,不同种的微生物。在衡量产品性能的时候有时候需要对不同微生物进行分别计数。我们对不同微生物进行分别计数要建立在微生物鉴定的基础上。 ▶细胞形态 微生物可以分为多种形态,球菌,杆菌,芽孢,大的酵母。如果我们需要计数的不同微生物具有明显的细胞形态和大小差异,可以用显微计数方法来对不同的微生物进行分别计数。
▶染色
重要参考文献:多种乳酸菌混合制剂及发酵乳活菌计数方法的研究
以玉米浆为例,很显然玉米浆糖蜜这些副产物本身就含有大量的色素,固形物,肯定会使得培养基颜色发生变化,由于其中含有大量盐,产生沉淀在所难免。这种情况怎么测定生物量就成为了一个难题。根据我们的经验,提以下几点建议。 ▶这类培养基原料使用前可以离心,去除里面的沉淀。当然这可能会影响培养基组成,需要综合考虑,有得就有失。也可以在取样后进行低速离心后采取比浊法,需要去尝试。 ▶当该类成分浓度固定时,对样品进行稀释,并以未接种的培养基为对照,也是可以对菌体浓度进行估计。 ▶采取间接法中的代谢法。 ▶平板法是肯定可以用的,只是比较费劲,通量较低。 |
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