毕赤酵母固态发酵诱导产酶

1固态发酵方法

①准备固态发酵瓶，将聚氨酯海绵切割成约为 1 cm3的立方体，称取 1.1 g 洁净的聚氨酯海绵立方体置于 100 mL 锥形瓶中，进行高压蒸汽灭菌。

②接种，将活化的工程菌 GS115-AfTan2.0 以 1%的接种量接种于 BMGY 培养基，摇匀后分装至装有无菌海绵立方体的锥形瓶和无菌的空锥形瓶。

③培养：在进行 30 ℃静置的固态发酵前，将锥形瓶置于 30 ℃，200 r/min 振荡培养 5 min，使海绵立方体充分吸收 BMGY 培养；

④取样，选取海绵块，通过注射器将海绵块中的液体挤压到无菌离心管中，再进行相关处理和分析。

⑤甲醇诱导，固态发酵采用喷壶将甲醇喷洒至海绵立方体表面。

2.固态发酵和液态发酵的差异

▼生物量的影响

固态发酵获得的生物量比液态发酵的生物量高出22.3%。

▼固、液态发酵对重组菌产酶量的影响

固态发酵在获得较高的生物量的情况下，外源蛋白表达量却非常低。

3.讨论

在固态发酵中液态的培养基吸附在蓬松的基质（聚氨酯海绵）上，面积/体积比较高，培养基中的氧气含量更高；而液态发酵由于面积/体积比较低，培养基中的氧气含量较低，酵母将消耗大量能量用于细胞维持。因此，相比于液态发酵，固态发酵在细胞维持上消耗较低的能量，同时获得了更多的生物量。

但是在获得较高生物量的前提下，外源蛋白的表达水平却相对较低。分析其原因主要可能是①固态发酵过程中并没有给毕赤酵母一个稳定的甲醇浓度。②甲醇很难从表面扩散到海绵体内部③不利于产物的累积。

虽然该方法并没有获得较高的表达，但是仍然有借鉴意义，可以从以下几方面考虑：

①生产菌体

②生长偶联系产品也许可以应用

③想办法改善甲醇诱导环境